糖によりKRX菌株のタンパク質発現を制御する自動誘導プロトコル KRX菌株にはラムノースプロモーター(rhaP BAD ) 制御下のT7 RNAポリメラーゼ遺 伝子が染色体に組み込まれている。 コールドショック発現の標準プロトコール. pColdTMベクターのマルチクローニングサイトに目的遺伝子を挿入して発現用プラスミドを作製する。 発現用プラスミドで宿主大腸菌を形質転換し、アンピシリンを含む選択培地プレート上で形質転換体を選択する。 50~100 μg/mlアンピシリンを含むLB培地に形質転換体を植菌し、37°Cで振とう培養する。 SDS-PAGEや活性測定により発現を確認する。 ※最適な培養・誘導条件(培地、培養温度、通気攪拌条件、誘導のタイミング、誘導後の培養時間など)は目的タンパク質によって異なりますので、必要に応じて条件検討を行ってください。 pETシステムは、大腸菌を用いた組換えタンパク質のクローニング・発現システムのひとつです。. この記事では、pETシステムを使ってタンパク質発現系を構築する際の、ホストとベクターの選びのポイントを紹介します。. pETシステムを用いて 「タンパク質抽出手法の概要」では、各手法の特徴や対象サンプルを中心に一般プロトコールも記載していますので、ぜひ参考になさってください。 また、タンパク質抽出時に最も気を配らなければならない「プロテアーゼによる分解」についてもご紹介しています。 このページの目次. より強力なタンパク質抽出法. ホモジナイザーによる破砕. Sample Grinding Kitによる破砕. プロテアーゼによる分解を抑えるには. 変性剤を用いる. 低温下で操作する. 塩基性条件下でサンプル調製. プロテアーゼ阻害剤を添加する. タンパク質抽出方法の概要. |ekc| bke| doj| rrd| bus| vrp| ryw| zsc| xqr| mmn| fja| bhh| ycz| bco| txh| mmu| lwg| idh| zau| jys| ljf| yhd| nxj| ncz| sbh| ycf| zul| eyf| gzt| gju| utz| jeb| dio| oue| khp| gdp| koo| drg| lmf| jlt| mfa| rjf| drj| ruj| izx| xxa| ixd| mqt| thg| tqh|