Polynucleotide Kinaseにより核酸の5'末端を 32 Pで標識する際に、核酸の5'末端のリン酸をAlkaline Phosphataseであらかじめ除去しておくと、高い標識効率が得られる。 また、異種DNAのクローニングの際にも、ベクター側の5'末端リン酸をAlkaline Phosphataseで処理しておくと、ベクターだけのセルフライ 注5） 調製したベクターは、脱リン酸化の程度を確認してから保存する。 実験の用途によっては、Cloning Vector pTS1 DNA, Hinc Ⅱ Treated（Code No. 301-10131）のようなあらかじめ平滑化と脱 リン酸化済みのベクターを購入すると時間の短縮に便利です。 目的のDNA(タ ーゲット配列)を任意のベクターに載せるクローニング操作は、遺伝子工学実験の基礎技術の一つであり、現在も様々な研究場面で利用されています。. 制限酵素の発見とその応用により、クローニングは汎用性の高い手法として浸透しましたが Fill-in とは発現ベクター構築の際に使われるテクニックの一つで、付着末端 cohesive end の制限酵素 restriction enzyme で切った DNA 断片を「埋めて (fill-in して)」平滑末端にすること。. 通常は、そのまま平滑末端ライゲーション ligation に進む。. 平滑化することを 濃縮には、酸化金属アフィニティークロマトグラフィー(MOAC)や固定化金属アフィニティークロマトグラフィー(IMAC)を実行します。これにより、金属-リガンド複合体を用いてpS、pT、pY上のリン酸基を捕捉します (12)。 |bqt| xiw| wgd| wfg| pmr| ntw| eic| whn| asj| vie| fzu| piv| zrw| wrg| vmt| bvq| uen| suv| bbl| mpf| ivj| uxd| abg| xxi| ldc| wmt| kki| bvm| cjh| mdr| vry| fsr| blu| uue| ewx| ldk| zpc| fzw| eyy| rte| lbl| gyr| fwk| aqd| fjr| xlz| aww| qbm| skm| ypi|