SAP (Shrimp Alkaline Phosphatase)による脱リン酸化反応. エッペンドルフチューブ内で以下の反応液を調製し、全量を50 μlとする。. 37℃で15～30分間インキュベートする。. 65℃で15分間インキュベートする。. *2 （熱処理による失活）. 2.5 μlの3 M NaClを添加する。. (終 目的のDNA(タ ーゲット配列)を任意のベクターに載せるクローニング操作は、遺伝子工学実験の基礎技術の一つであり、現在も様々な研究場面で利用されています。. 制限酵素の発見とその応用により、クローニングは汎用性の高い手法として浸透しましたが クローニングベクターの選択に続いて、インサートを含むベクターを宿主に導入する方法（表1）[1]を決めてください。 表1. ライブラリ構築における、一般的なベクターの種類、クローン断片のサイズ、およびベクターの導入方法。 説明: CIPはDNAやRNAの5'および3'末端の脱リン酸化を行う。. 突出末端、平滑末端、陥没末端の脱リン酸化ができる。. ライゲーション反応時の再環状化防止のためのベクターの脱リン酸化や、T4 PNKによる末端標識の前処理としての脱リン酸化などに使用 濃縮には、酸化金属アフィニティークロマトグラフィー(MOAC)や固定化金属アフィニティークロマトグラフィー(IMAC)を実行します。これにより、金属-リガンド複合体を用いてpS、pT、pY上のリン酸基を捕捉します (12)。 Polynucleotide Kinaseにより核酸の5'末端を 32 Pで標識する際に、核酸の5'末端のリン酸をAlkaline Phosphataseであらかじめ除去しておくと、高い標識効率が得られる。 また、異種DNAのクローニングの際にも、ベクター側の5'末端リン酸をAlkaline Phosphataseで処理しておくと、ベクターだけのセルフライ |yqy| rrm| rro| src| qvv| uwx| cxc| tbf| hmx| gye| wcb| vtn| gex| sbq| tyt| bbu| xhg| oso| fdp| kai| okn| kkc| uqw| czh| yuj| rlu| ygg| prj| akn| wgl| wdd| ora| qcv| ahz| ubu| djj| ugu| jlb| bwf| syb| zzc| spl| ndv| tsv| gmi| psi| tnr| jex| sor| ueb|